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. Das Prinzip der PCR-Technologie

In diesem Jahr tobt die COVID-19 auf der ganzen Welt, und jeder muss von Nukleinsäure tests gehört haben. Beim Nachweis der Epidemie spielt die PCR-Fluoreszenz technologie eine zentrale Rolle, mit der Inspektoren schnell und genau feststellen können, ob sie mit dem COVID-19 infiziert sind.

Was genau ist die PCR-Technologie?

PCR ist eine Abkürzung für Polymerase Chain Reaction. Kurz gesagt, PCR besteht aus drei grundlegenden Reaktions schritten: Hochtemperatur-Denaturierung-Nieder temperatur glühen-Medium temperatur verlängerung:

1. Denaturierung von DNA, um einzels trängig zu werden

Nachdem die Matrizen-DNA für einen bestimmten Zeitraum auf etwa 95 ° C erhitzt wurde, wird der Doppelstrang der Matrizen-DNA in einen Einzels trang dissoziiert, so dass er an den Primer binden und sich auf die nächste Reaktions runde vorbereiten kann.

2. glühen bei niedriger temperatur

Nachdem die Matrizen-DNA zu Einzelst rängen denaturiert wurde, wird die Temperatur auf etwa 55 ° C gesenkt und die Primer werden mit den komplementären Sequenzen der Template-DNA-Einzelst ränge gepaart.

3. Mittlere Temperatur verlängerung

Unter der Wirkung des Taq-Enzyms verwenden die DNA-Matrizen-und Primer-Konjugate dNTP als Reaktions rohmaterial und die Ziels equenz als Matrize gemäß dem Prinzip der Basen paarung und der halb reservierten Replikation und synthetisieren schließlich eine neue halb reservierte Replikation Kette komplementär zur Template-DNA-Kette.

Ⅱ. Nachweis methoden der fluor zieren den PCR

Gegenwärtig verwenden die meisten von der staatlichen Arzneimittel behörde Chinas zugelassenen COVID-19 detektion reagenten fluor zierende PCR-Methoden, um die COVID-19 nachzuweisen.

Das fluor zierende PCR-Verfahren bezieht sich auf das Hinzufügen von fluor zieren den Gruppen zum PCR-Reaktions system. Mit dem Fortschreiten der PCR-Amplifi kation akkumulieren sich die Reaktions produkte weiter und die Fluoreszenz signal intensität steigt ebenfalls proportional an. Fluoreszenz amplifi kation kurven graph, Echtzeit detektion des PCR-Fluoreszenz prozesses.

Ⅲ. Grundsätze der Auswahl von PCR-fluor zieren den Verbrauchs materialien

1. Material

PCR besteht im Allgemeinen aus PP-Material, da PCR/qPCR-Verbrauchs materialien normaler weise in direktem Kontakt mit Reagenzien oder Proben stehen, während Polypropylen (PP)-Material ein biologisch inertes Material ist, die Oberfläche nicht leicht an Biomolekülen zu haften ist und eine gute chemische Beständigkeit aufweist und Temperatur. Toleranz (kann bei 121 ° C autoklav iert werden und kann auch Temperatur änderungen während des thermischen Zyklus standhalten). PCR-Verbrauchs materialien sind alle PP-Material.

2. PCR Rohr/Platten volumen

Wie wählt man PCR-Röhrchen/Platten unterschied licher Volumina?

Auswahl zweck: Wählen Sie das entsprechende Produkt entsprechend den spezifischen experimentellen Anforderungen aus. Das Volumen der PCR-Röhrchen kann meist die Anforderungen von PCR-Reaktionen erfüllen. PCR-Röhrchen sind ideal für PCR/qPCR-Experimente mit niedrigem bis mittlerem Durchsatz, wobei einzelne Röhrchen und Streifen die beiden am häufigsten verwendeten Formate sind.

Eine einzelne Röhre bietet die Flexibilität, die genaue Anzahl der zu laufenden Reaktionen einzustellen. Alternativ kann ein einzelnes 0,5-ml-Rohr für größere Reaktions volumina ausgewählt werden.

Kupplungen sind normaler weise im 8-oder 12-Rohr-Format mit separaten oder mit Kappen erhältlich. Kompatibel mit Ein-und Mehr kanal pipetten für Experimente mit niedrigem und mittlerem Durchsatz. Streifen mit Kappen öffnen und schließen Proben röhrchen unabhängig voneinander, um eine Kontamination der Probe zu verhindern.

3. Wandstärke

Die Rohrwand dicke wirkt sich direkt auf die Wärme leitfähig keit aus, und extrem dünne Wandstärken optimieren die Wärme übertragung und verkürzen die Zykluszeit. Der ultra dünnwandige Kunststoff ist etwa 50% dünner als die Standard version, wodurch die Wärme barriere weiter verringert wird, was zu einer schnelleren und robusteren Reaktion führt. PCR-Verbrauchs materialien sind alle ultra dünne Rohr wände.

4. Farbe

PCR-Platten sind häufig in verschiedenen Farbformaten erhältlich, um die visuelle Differenzierung und Identifizierung von Proben zu erleichtern, insbesondere in Experimenten mit hohem Durchsatz. Für gewöhnliche PCR-Reaktionen ist es möglich, transparente oder farbige PCR-Röhrchen zu verwenden, und transparente PCR-Röhrchen sind für das Proben klassifizierung management hilfreicher.

Obwohl die Farbe des Kunststoffs keinen Einfluss auf die DNA-Amplifi kation hat, werden hochwertige weiße PCR-Verbrauchs materialien für qPCR empfohlen. Da qPCR einen quantitativen Nachweis der Fluoreszenz signal intensität in Echtzeit erfordert, ist eine empfindliche und genaue Fluoreszenz signal übertragung erforderlich. Experimente haben gezeigt, dass weiße PCR-Produkte im Vergleich zu herkömmlichen transparenten PCR-Produkten das Fluoreszenz signal weitgehend reflektieren, die Kreuz kontamination von Weltraums ignalen verringern und die Ergebnisse einer quantitativen Echtzeit-Fluoreszenz-PCR erhalten können.

Verschiedene Marken von Instrumenten, aufgrund des unterschied lichen Positions designs des Fluoreszenz detektors, beziehen Sie sich bitte auf die vom Hersteller empfohlenen Materialien. Für das Echtzeit-PCR-Instrument Bio-Rad CFX oder Roche 480 empfiehlt der Hersteller die Verwendung weißer PCR-Platten. Da die PCR-Platte entweder weiß oder transparent ist und verschiedene Spezifikationen aufweist, ist sie für gängige PCR-Instrumente auf dem Markt geeignet.