Nachrichten

Abhängig vom Unterschied in der Bestimmung von Antigenen und Antikörpern gibt es viele automatische ELISA-Messmodi, wie direkte Methode, indirekte Methode, doppelte Antikörper-Sandwich-Methode (direkt, indirekt), kom petit ive Hemmung methode (direkt, Sandwich usw.), Capture-Methode usw. In klinischen Laboratorien, Üblicher weise verwendete ELISA-Messmodi umfassen die doppelte Antikörper-Sandwich-Methode, die indirekte Methode, die doppelte Antigen-Sandwich-Methode, die kom petit ive Hemmung methode und die Abfang methode.

Bei der Bestimmung von Antigenen ist die am häufigsten verwendete Methode zur Bestimmung von Protein-Makromolekül-Antigenen die Doppel-Antikörper-Sandwich-Methode. Für kleine Moleküle mit nur einem einzigen Epitop wird eine kom petit ive Hemmung methode verwendet; Die Antikörper bestimmung verwendet normaler weise eine indirekte Methode, eine doppelte Antigen-Sandwich-Methode, eine kom petit ive Hemmung methode und eine Abfang methode.

1. doppelte Antikörper-Sandwich-Methode der ELISA-Workstation

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the ELISA-Arbeitsplatz uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Medizinisches Testkit.

Gegenwärtig verwendet in unserem klinischen Labor die Bestimmung von makro molekularen Antigenen wie HBsAg, Alpha-Feto protein (α-Feto protein, αFP), prostata spezifischem Antigen (PSA), CA-Serien markern, hCG und Hormonen usw. grunds ätzlich eine einstufige Methode. Verglichen mit der zweistufigen Methode ist die einstufige Methode einfach zu bedienen, weist jedoch ihre inhärenten Mängel auf. Wenn es nicht gut gehandhabt wird, sind die Ergebnisse des Doppel-Antikörper-Sandwich-Immuno assays aufgrund des Vorhanden seins des Hook-Effekts falsch negative oder niedrige quantitative Ergebnisse.

2. Wettbewerbs rechtliche Prüfung der ELISA-Arbeits station

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The ELISA-Arbeitsplatz can only use the competitive inhibition method.

In diesem Assay-Modus muss eine Kombination aus kleinen Molekülen und Enzymen erhalten werden. Die Herstellung von nieder molekularen Enzym konjugaten ist nicht so einfach wie die von Antikörper-Enzym konjugaten, und ihre Reinigung ist auch ziemlich schwierig. Der Molekular gewichts unterschied zwischen dem nieder molekül gebundenen Enzym und dem freien Enzym ist gering, und es ist schwierig, sich unter Verwendung allgemeiner Molekular sieb methoden zu trennen. Daher versuchen einige Leute, eine ELISA-Methode mit Doppel-Antikörper-Sandwich-Wettbewerb zur Bestimmung kleiner Moleküle auf der Grundlage der Synthese von Di-oder Multimer-Klein molekülen zu etablieren. Die Empfindlichkeit und Spezifität der Bestimmung wurde verbessert.

3. Indirekte Methode der Antikörper bestimmung im ELISA-Arbeitsplatz

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Antikörper-Testkit. Bevor es schwierig ist, hochreine und genau definierte Antigene zu erhalten, oder wenn die Antigene komplizierter sind, wird im Allgemeinen die indirekte Methode verwendet.

Heutzutage sind die häufig verwendeten klinischen Testobjekte des Hepatitis-C-Virus-Antikörpers (Anti-HCV) alle indirekte Methoden, und die indirekte Methode wird zum Nachweis von Antikörpern verwendet. Streng genommen wird nur die IgG-Klasse von Antikörpern gemessen, und IgM-und IgA-Klassen sind nicht beteiligt. Dies wird durch den enzym markierten sekundären Antikörper bestimmt. Gegenwärtig verwenden einige spezifische IgⅢ-Antikörper-Erkennungs kits die indirekte Methode.

4. doppelte Antigen-Sandwich-Methode der ELISA-Workstation

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the ELISA-Arbeitsplatz has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. Wettbewerbs recht des ELISA-Arbeitsplatzes

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the ELISA-Arbeitsplatz can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).